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培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，由于培養(yǎng)的環(huán)境各不相同，同時(shí)細(xì)胞各階段的形態(tài)也存在一定差異，沒有一個(gè)確定的參照物去比對，很多老師同學(xué)也無法確定自己所養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)是否正常。
那么如何判斷細(xì)胞狀態(tài)是正常還是異常呢？本期細(xì)胞學(xué)堂將詳介紹幾種常用的判斷方法，學(xué)會(huì)這幾招，輕松辨別細(xì)胞狀態(tài)！
01 如何判斷細(xì)胞活率
臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性，可以檢測出細(xì)胞是否存活。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。
通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。活細(xì)胞不著色，而死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色。
(無色為活細(xì)胞，藍(lán)色為死細(xì)胞)
染色時(shí)間不能太長，3分鐘內(nèi)觀察，超時(shí)后活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色，使檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。
在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)：
懸浮細(xì)胞
活細(xì)胞透亮有光澤，死細(xì)胞暗淡無光且膜碎裂；
貼壁細(xì)胞
活細(xì)胞可貼壁且膜完整，死細(xì)胞不能貼壁。
（紅色圈為死細(xì)胞；綠色圈為活細(xì)胞；箭頭為血清雜質(zhì)）
細(xì)胞膜作為判斷細(xì)胞活性的標(biāo)準(zhǔn)之一，有的老師用“邊界清晰"來界定，認(rèn)為邊界不清晰則是細(xì)胞狀態(tài)變差，實(shí)際情況我們也有發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞膜邊緣很薄再加上顯微鏡不清晰導(dǎo)致誤判，所以小普認(rèn)為膜邊界是否清晰并不是金標(biāo)準(zhǔn)，我們更傾向于以細(xì)胞膜完整性作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，“膜完整"則為活細(xì)胞。
（該細(xì)胞膜邊緣薄透，若為黃光顯微鏡可能看不清）
02 如何判斷細(xì)胞形態(tài)異常
1
你的細(xì)胞應(yīng)該長成什么樣?
在懷疑細(xì)胞形態(tài)改變之前，我們首先得知道一個(gè)正常的細(xì)胞應(yīng)該是什么樣的，誠如每顆多肉都會(huì)有其獨(dú)-特的色彩和習(xí)性，細(xì)胞也有其獨(dú)-特的習(xí)性，包括生長速度、形態(tài)、培養(yǎng)環(huán)境等；
2
從哪幾個(gè)方面判定細(xì)胞形態(tài)異常？
細(xì)胞的微環(huán)境會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變，例如血清直接影響細(xì)胞的形態(tài)：
HK-2細(xì)胞顯微圖（無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)）
HK-2細(xì)胞顯微圖（MEM +10%FBS培養(yǎng)）
是否所有的形態(tài)改變都可以被定義為異常呢？答案是否定的。從上述例子中可以看出，兩種培養(yǎng)環(huán)境下細(xì)胞形態(tài)不同，但狀態(tài)都并無異常，因此我們需要視不同情況、綜合細(xì)胞增長速度進(jìn)行評判：
未更換培養(yǎng)體系時(shí)
在培養(yǎng)體系沒有更換的前提下，細(xì)胞碎裂增多，黑點(diǎn)增多、形態(tài)改變、生長速度變慢，則應(yīng)考慮外源刺激物導(dǎo)致，可能已被污染，需排查污染源，并做針對性的預(yù)防措施。
更換了培養(yǎng)體系時(shí)
1
如果是因?yàn)楦鼡Q了培養(yǎng)體系后導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)改變，在細(xì)胞生長速度正常的情況下，可正常培養(yǎng)；
2
如果細(xì)胞更換培養(yǎng)條件后，嚴(yán)重變形甚至貼壁減少且不能正常傳代，必須進(jìn)行干預(yù)，可通過包被培養(yǎng)瓶促進(jìn)貼壁、增加血清濃度、與原培養(yǎng)基混合使用讓細(xì)胞過渡適應(yīng)等方式進(jìn)行改善；
3
如果細(xì)胞對于新環(huán)境反應(yīng)激烈，直接死亡，則需更換培養(yǎng)體系；
03 如何判斷細(xì)胞污染
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